Qual a importância dos carboidratos da ingestão para a função ruminal?

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Abstract

Os carboidratos são as biomoléculas mais abundantes da natureza, exercem função estrutural e energética. Os carboidratos são os principais constituintes das plantas forrageiras, sendo por tanto a principal fonte de energia para os ruminantes. Os carboidratos podem ser classificados de acordo com sua estrutura, função e do ponto de vista nutricional, que o dividi em carboidratos fibrosos e não fibrosos. Os carboidratos são fermentados no rúmen por ação da flora microbiana, a qual tem seu desenvolvimento afetado diretamente pelo tipo de carboidrato, pois os microrganismos ruminais apresentam especificidade quanto ao substrato que fermentam. Além de que, a taxa de fermentação dos carboidratos no rúmen altera as condições de ambiente ruminal, afetando diretamente o desenvolvimento dos microrganismos nele presente. Os carboidratos não fibrosos apresentam alta taxa de fermentação, levando ao abaixamento do pH ruminal, influenciando o desenvolvimento da flora ruminal, já os carboidratos não fibrosos apresentam baixa taxa de fermentação, e estimulam a ruminação e maior salivação do animal, o que auxilia no tamponamento do pH do rúmen. Por essa razão, o equilíbrio no fornecimento de carboidratos fibrosos e não fibrosos é importante para manter o ambiente ruminal estável. O principal produto da fermentação ruminal dos carboidratos são os AGV's, que são utilizados pelos ruminantes como sua principal fonte energética. 

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Published

2016-10-19

How to Cite

Oliveira, V. da S., Neto, J. A. S., Valença, R. de L., Silva, B. C. D. da, & Santos, A. C. P. dos. (2016). CARBOIDRATOS FIBROSOS E NÃO FIBROSOS NA DIETA DE RUMINANTES E SEUS EFEITOS SOBRE A MICROBIOTA RUMINAL. Veterinary News, 22(2). https://doi.org/10.14393/VTv22n2a2016.32660

1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel Programa de Pós-Graduação em Zootecnia Dissertação Farinha de samambaia d água (Azolla filiculoides) na dieta de codornas japonesas Diciane Zeni Giehl Pelotas, 2020

2 Diciane Zeni Giehl Farinha de samambaia d água (Azolla filiculoides) na dieta de codornas japonesas Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação em Zootecnia da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel da Universidade Federal de Pelotas, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciência Animal, na área de concentração: Nutrição de Não Ruminantes. Orientador: Prof. Ph.D. Eduardo Gonçalves Xavier Co-orientador: Prof. Dr. Victor Fernando Büttow Roll Co-orientadora: Prof. Dra. Débora Cristina Nichelle Lopes Pelotas, 2020

3 Diciane Zeni Giehl Farinha de samambaia d água (Azolla filiculoides) na dieta de codornas japonesas Dissertação aprovada, como requisito parcial, para obtenção do grau de Mestre em Ciência Animal, pelo Programa de Pós-Graduação em Zootecnia da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas. Data da defesa: 27 de fevereiro de 2020 Banca Examinadora: Prof. Ph.D. Eduardo Gonçalves Xavier. Ph.D. em Animal Sciences pela University of Kentucky Prof. Ph.D. Fernando Rutz. Ph.D. em Animal Sciences pela University of Kentucky Prof. Dr. Marcos Antonio Anciuti. Doutor em Produção Animal pela Universidade Federal de Pelotas Dra. Aline Arassiana Piccini Roll. Doutora em Nutrição Animal pela Universidade Federal de Pelotas

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5 Dedico este trabalho a minha irmã Dionéia. Pelo coração enorme que tens e pelo ser humano maravilhoso que és!

6 Agradecimentos À Universidade Federal de Pelotas e ao Programa de Pós-Graduação em Zootecnia. À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Ao professor e orientador Ph.D. Eduardo Gonçalves Xavier e aos professores e co-orientadores Dr. Victor Fernando Büttow Roll e Dra. Débora Cristina Nichelle Lopes. Aos professores Ph.D. Fernando Rutz, Dr. Marcos Antonio Anciuti, Dra. Ana Paula Nunes e Dra. Márcia Arocha Gularte. Aos técnicos de laboratório M.Sc. André Silveira da Silva, Ana Elice Furtado da Silva e Dr. Luis Augusto Xavier Cruz. Aos servidores Norma Alessandra Dias Brauner e José Ulisses da Silva Azambuja e ao Médico Veterinário M.Sc. Paulo Ricardo Centeno Rodrigues. À Polinutri Alimentos S.A. representada pelo Dr. Everton Elibert Rodrigues. Às colegas da pós-graduação, Dra. Aline Arassiana Piccini Roll, Dra. Caroline Bavaresco, M.Sc. Suelen Nunes da Silva, M.Sc. Carolina Oreques de Oliveira, M.Sc. Renata Cedres Dias, M.Sc. Paola de Freitas Feltrin, Joyce Pereira Lopes e Brenna Kelen Mello de Freitas. Aos alunos da graduação Camila Von Mühlen, Igor Borges Soares e Adeline Bogo Madril. Aos amigos Maicon da Silva Lacerda, Allan Patrick Timm de Oliveira, M.Sc. Roberta Faria Silveira e M.Sc. Michelle de Almeida Ollé. Aos meus pais José Eugênio Giehl e Elaine Maria Kieling Giehl. A minha irmã Dionéia Zuleica Giehl e minha sobrinha Thalia Luiza Piva. A cada um, eu agradeço de coração toda a receptividade, paciência, auxílio e ombro amigo. Vocês compartilharam comigo todos os sentimentos que poderia expressar durante este período. Obrigada.

7 Resumo GIEHL, Diciane Zeni. Farinha de samambaia d água (Azolla filiculoides) na dieta de codornas japonesas. Orientador: Eduardo Gonçalves Xavier f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brasil, As plantas aquáticas proporcionam resultados positivos quanto a sua inclusão na dieta de monogástricos e o gênero Azolla tem despertado interesse pelo seu valor nutritivo, especialmente pela sua alta composição proteica. Deste modo, esta pesquisa teve como objetivo avaliar a utilização da farinha de Azolla filiculoides como ingrediente na dieta de codornas japonesas em postura, verificando o seu efeito sobre o desempenho produtivo, a sua digestibilidade aparente, qualidade e análise sensorial dos ovos, biometria da carcaça e de órgãos, morfometria intestinal e análise econômica das dietas. Foram utilizadas 100 codornas (Coturnix coturnix japonica) em postura, alojadas em gaiolas metálicas, duas a duas e distribuídas aleatoriamente aos tratamentos em delineamento inteiramente ao acaso. As dietas foram divididas em cinco tratamentos, de acordo com os níveis de inclusão da farinha de Azolla filiculoides (0%, 2%, 4%, 6% e 8%), cada um com 10 repetições. O período experimental foi de 28 dias. As médias dos tratamentos foram comparadas através do teste de Tukey a 5% de probabilidade. Foi utilizada análise de regressão polinomial a 5% para a determinação do nível ótimo de utilização da farinha de Azolla. As variáveis ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar por dúzia e por massa de ovos e a qualidade dos ovos foram analisadas semanalmente. A produção de ovos foi registrada diariamente. Os coeficientes de digestibilidade aparente foram determinados após a primeira semana de adaptação das aves às dietas experimentais. Ao final do período experimental, foram selecionadas ao acaso seis aves por tratamento para verificação da biometria de órgãos e análise histológica do intestino. Para a análise sensorial, foram utilizados os ovos produzidos nos últimos três dias que antecederam o fim do experimento e as médias foram comparadas pelo teste de Dunnet a 5% de probabilidade. Os resultados comprovam que é possível incluir até 8% da farinha de Azolla filiculoides na dieta de codornas japonesas em postura sem afetar negativamente o desempenho das aves e a qualidade dos ovos produzidos, incrementando a coloração das gemas e reduzindo em até 10% os custos produtivos das dietas. Palavras-chave: Alimento alternativo. Avicultura. Coturnix coturnix japonica. Macrófita aquática. Nutrição animal. Qualidade de ovos.

8 Abstract GIEHL, Diciane Zeni. Water fern meal (Azolla filiculoides) in the diet of Japanese quails. Advisor: Eduardo Gonçalves Xavier f. Thesis (Master in Animal Science) - Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brazil, Aquatic plants provide positive results when added to the monogastrics diets and the genus Azolla is of particular interest for its nutritional value, especially for its high protein composition. Thus, this research evaluated the utilization of Azolla filiculoides meal as an ingredient in the diet of laying quails, verifying its effect on productive performance, digestibility, quality and sensory analysis of eggs, biometry of carcass and organs, intestinal morphometry and economics of the diets. A total of 100 laying quails (Coturnix coturnix japonica) were housed in pairs in metallic cages and randomly distributed to the treatments in a completely randomized design. The diets were divided into five treatments, according to the levels of inclusion of Azolla filiculoides meal (0%, 2%, 4%, 6% and 8%), each with 10 replications. The experimental period was a 28-day cycle. The treatment means were compared with the Tukey test at 5%. Analysis of polynomial regression at 5% probability was used to determine the optimal level of inclusion of Azolla meal in the diets. Weight gain, feed intake, feed conversion per dozen and per egg mass and egg quality were analyzed weekly. Egg production was recorded everyday. The apparent digestibility coefficients were determined after the first week of adaptation of the birds to the experimental diets. At the end of the experimental period, six birds were randlomly selected per treatment for organ biometry and histological analysis of the intestine. For the sensory analysis, eggs produced in the last three days before the end of the production cycle were used and the averages were compared with the Dunnet test at 5%. The results showed the feasibility of adding up to 8% of Azolla filiculoides meal in the Japanese quail diet without negatively affecting performance and the quality of the eggs, increasing yolk pigmentation and reducing the production costs of the diets up to 10%. Keywords: Alternative feedstuff. Animal nutrition. Aquatic macrophyte. Coturnix coturnix japonica. Egg quality. Poultry production.

9 Lista de Figuras Figura 1 Fotografia. Macrófita aquática Azolla filiculoides Lam Figura 2 Fotografia. Tanque para cultivo da macrófita aquática Azolla filiculoides Figura 3 Fotografia. Volume da biomassa da Azolla filiculoides colhida, préseca e moída Figura 4 Fotografia. Volume de ração ofertada diariamente para cada ave Figura 5 Fotografia. Identificação individual das aves com uso de anilha numérica Figura 6 Fotografia. Gaiolas metálicas dispostas em baterias para a criação de codornas Figura 7 Fotografia. Coloração das gemas de ovos de codornas japonesas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides Figura 8 Sistema de coordenadas de cor CIE Figura 9 Fotografia. Análise sensorial de ovos de codornas japonesas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides Figura 10 Fotografia. Morfometria intestinal de codornas japonesas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides em imagem microscópica (10x) Figura 11 Gráfico. Coloração das gemas de ovos de codornas japonesas alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides avaliadas com o uso de leque colorimétrico Figura 12 Coloração das gemas de ovos de codornas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides pelo sistema de coordenadas de cor CIE Figura 13 Gráfico. Custo de produção (R$/100kg) das dietas contendo níveis de inclusão da farinha de Azolla filiculoides... 66

10 Lista de Tabelas Tabela 1 Composição centesimal e níveis nutricionais calculados das dietas com farinha de Azolla filiculoides para codornas japonesas em postura Tabela 2 Composição dos aminoácidos, em base seca, da farinha de Azolla filiculoides Tabela 3 Composição bromatológica, em base seca, da farinha de Azolla filiculoides Tabela 4 Análise bromatológica e de energia bruta, em base seca, das dietas (referência e com 20% de farinha de Azolla filiculoides) e das excretas de codornas japonesas em postura Tabela 5 Composição energética, em base seca, da farinha de Azolla filiculoides Tabela 6 Peso inicial, peso final e ganho de peso de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 7 Produção de ovos, consumo de ração e conversão alimentar de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 8 Análise bromatológica, em base seca, das dietas com farinha de Azolla filiculoides e excretas de codornas japonesas em postura Tabela 9 Coeficiente de digestibilidade, em base seca, de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 10 Qualidade interna e externa de ovos de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 11 Colorimetria pelos métodos subjetivo (leque) e objetivo (com colorímetro digital) das gemas de ovos de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides... 59

11 Tabela 12 Análise sensorial (textura, sabor e cor da gema) de ovos de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 13 Biometria da carcaça e de órgãos de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 14 Morfometria do íleo (comprimento do vilo, comprimento da cripta e relação comprimento do vilo:comprimento da cripta) de codornas japonesas em postura alimentadas com dietas contendo farinha de Azolla filiculoides Tabela 15 Custo (R$/kg) das dietas com farinha de Azolla filiculoides para codornas japonesas em postura... 65

12 Sumário 1 Introdução Revisão bibliográfica Coturnicultura Produção mundial e brasileira Codorna japonesa: características produtivas Criação e instalações Ambiência Produção de ovos Qualidade externa e interna do ovo Nutrição animal Macrófitas aquáticas como alternativa alimentar Azolla Azolla filiculoides Lam Características da espécie Crescimento e reprodução Principais utilizações Composição nutricional Material e métodos Aprovação ética Cultivo da Azolla filiculoides Produção da farinha de Azolla filiculoides Análise bromatológica da farinha de Azolla filiculoides Ensaio de digestibilidade Formulação das dietas Níveis de inclusão da farinha de Azolla filiculoides Produção das dietas experimentais Local e duração do experimento Animais experimentais Manejos Pesagem, identificação e alojamento das aves Iluminação, temperatura e umidade... 42

13 Oferta alimentar Variáveis analisadas Peso das aves Produção de ovos Consumo de ração e conversão alimentar Mortalidade Coeficiente de digestibilidade Qualidade de ovos Análise sensorial Biometria da carcaça e de órgãos Morfometria intestinal Análise econômica Análise estatística Resultados e discussão Produção e composição nutricional da farinha de Azolla filiculoides Desempenho zootécnico das aves Peso corporal Produção de ovos, consumo de ração e conversão alimentar Mortalidade Digestibilidade aparente Qualidade de ovos Análise sensorial dos ovos Biometria de carcaça e órgãos Morfometria intestinal Análise econômica Conclusões Referências... 68

14 1 Introdução A avicultura é um dos setores da produção animal que mais cresce no Brasil, merecendo destaque mundial, com foco principal na produção de carne e ovos. Entre os fatores responsáveis por este desenvolvimento, se evidencia a oferta de proteína animal barata com alto valor nutricional e a necessidade de menor tempo para ser produzida quando comparada com outras espécies animais (ABADI et al., 2018). A atividade avícola compreende diversos ramos, dentre eles a coturnicultura, outro segmento de produção que também se encontra em expansão, embora em menor escala (ALMEIDA et al., 2013). A criação de codornas desperta interesse principalmente pela rapidez no retorno do capital investido associado com a alta produtividade dessas aves, trazendo resultados econômicos satisfatórios quando trabalhada de maneira profissional (ALBINO; BARRETO, 2003). Existem diferentes espécies de codornas, e a japonesa (Coturnix coturnix japonica) é a mais utilizada na indústria e no campo da pesquisa científica para a produção de ovos (BAUNGARTNER, 1994). Assim como a carne, o ovo desempenha um importante papel na alimentação da população, pois além de ser uma fonte de proteína de baixo custo aquisitivo é rico nutricionalmente, com a presença de ácidos graxos essenciais, vitaminas, minerais e baixo teor de colesterol (MARTINS, 2002; TANUJA et al., 2018) e também, apresenta um sabor característico da espécie (FUJIKURA, 2004; EUCLYDES et al., 2013). Devido às mudanças nos hábitos alimentares da população, os produtos oriundos da avicultura obtiveram maior inclusão na alimentação. O consumo de ovos

15 13 de codornas, que antes se dava principalmente pelo seu gosto peculiar, deixou de ser apenas uma opção alimentar (VERCESE, 2010). Os últimos dados apresentados pelo Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE), mostram que a produção nacional de ovos de codorna no ano de 2016 foi cerca de 3,3 bilhões de unidades, praticamente o triplo do que era produzido há dez anos (IBGE, 2016). Embora se encontre em volume significativamente inferior à produção de ovos de galinha no país, que gira em torno de 44 bilhões, segundo dados da Associação Brasileira de Proteína Animal (ABPA, 2019) é uma atividade que se revela promissora. A criação de codornas por muito tempo foi considerada apenas como uma atividade de subsistência (BERTECHINI, 2010). No entanto, o investimento tecnológico nos plantéis e o aumento das pesquisas na área da nutrição, como na avaliação de alimentos utilizados nas dietas dessas aves, por exemplo, têm proporcionado o avanço da coturnicultura brasileira (SAKOMURA et al., 2014). Dentro do sistema produtivo animal, a alimentação é responsável pelo maior investimento nos custos totais na criação de aves (COSTA; FIGUEIREDO; LIMA, 2012). O milho e a soja são os ingredientes chave da formulação de dieta destes animais, como fonte energética e proteica, respectivamente (SILVA et al., 2009; RODRIGUES et al., 2013). Dessa forma, o interesse em reduzir os custos relacionados à nutrição, sem afetar o desempenho produtivo das aves, revela-se um dos grandes desafios à atividade. Estudos vêm sendo realizados na busca de matérias-primas de qualidade capazes de substituírem os ingredientes tradicionais, em especial os mais caros, como as fontes proteicas (ALALADE; IYAYI, 2006; HENRY-SILVA; CAMARGO; PEZZATO, 2006; LETERME et al., 2010; RAJA et al., 2012; SHALTOUT; EL-KOMI; EID, 2012; KUMARI et al., 2018). Visando a sustentabilidade da atividade, o uso de alimentos alternativos na nutrição de não ruminantes, como é o caso das macrófitas aquáticas, que não exigem altos custos de produção, ricos nutricionalmente e que podem ser incluídas na dieta dos animais é uma maneira de reduzir as despesas totais (ARNAULD et al., 2017; MÉNDEZ-MARTÍNEZ et al., 2018; MÉNDEZ- MARTÍNEZ et al., 2019). Para isso, é necessária que haja a disponibilidade do ingrediente e que o mesmo não apresente fatores antinutricionais capazes de afetar negativamente o desempenho zootécnico e/ou a saúde das aves (RAI et al., 2012;

16 14 KASHYAP et al., 2018, JOYSOWAL et al., 2018; SINHA; KUMAR; CHUDHARY, 2018). Na alimentação animal, as plantas aquáticas são possíveis alternativas que vêm ganhando cada vez mais espaço e interesse em relação à pesquisa. Nas dietas de aves, por exemplo, podem ser utilizadas como alimento in natura ou na forma de suplementação (BHASKARAN; KANNAPAN, 2015). Entre as plantas macrófitas, o gênero Azolla se caracteriza por apresentar alto valor nutritivo e grande facilidade de cultivo. Dentre as espécies existentes, a Azolla filiculoides é classificada como uma samambaia aquática flutuante, de água doce (WAGNER, 1997) e com altas taxas de crescimento, devido a sua associação simbiótica com a alga Anabaena azollae (VAN HOVE; LEJEUNE, 2002). No entanto, a maioria das pesquisas realizadas até o momento se referem ao seu uso como biofertilizante e ainda são poucos os estudos que investigam seu valor nutricional e inclusão na dieta dos animais, não havendo até o presente nenhum estudo disponível sobre o uso de Azolla filiculoides na dieta de codornas de postura. Dessa maneira, a sua utilização como ingrediente alternativo na dieta de codornas exige o conhecimento sobre a sua composição bromatológica, em especial a concentração proteica, pois no caso de codornas de postura, a necessidade está relacionada não apenas ao crescimento, mantença e produção, mas também com a síntese de proteína dos ovos que serão produzidos (SILVA; COSTA, 2009). A ausência de literatura sobre a utilização da Azolla filiculoides na dieta de codornas japonesas e a incerteza quanto ao seu valor nutricional definiram a necessidade de pesquisas relacionadas à nutrição dessas aves. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar a inclusão em até 8% da farinha de Azolla filiculoides na dieta de codornas japonesas em postura, a fim de verificar o seu efeito sobre o desempenho produtivo, a qualidade de ovos e a viabilidade econômica das dietas.

17 2 Revisão bibliográfica A atividade avícola apresenta destaque entre os sistemas de produção animal. As aves de postura participam desse desenvolvimento principalmente pela alta produtividade de ovos, uma proteína animal de alto valor biológico e com preço acessível (ABADI et al., 2018). 2.1 Coturnicultura Dentro da atividade avícola, a coturnicultura é responsável pela criação e reprodução de codornas, sendo que a produção de ovos representa a principal finalidade produtiva desta espécie animal (JÁCOME et al., 2012). A história da origem e domesticação das codornas tem sido investigada e acredita-se que estas aves são originárias do norte da África, da Europa e da Ásia, e pertencem à ordem dos galináceos e família dos fasianídeos (PINTO et al., 2002). As codornas (Coturnix coturnix sp.) inicialmente selvagens, passaram pelo processo de domesticação por japoneses, os quais as criaram unicamente como aves ornamentais, com especial interesse pelo canto dos machos (REIS, 1980; LUCOTTE, 1982; MILLS et al., 1997). Mais tarde, o foco passou a ser a produção de proteína animal para consumo humano e, a partir de então, foram realizados cruzamentos entre as codornas europeias com outras espécies selvagens e produzida uma subespécie, a codorna japonesa, agora domesticada. Iniciou assim a exploração comercial, visando a alta

18 16 qualidade nutricional dos seus produtos (MOURA et al., 2010; JÁCOME et al., 2012; PASTORE; OLIVEIRA; MUNIZ, 2012; BERTECHINI, 2013). Existem diferentes espécies de codornas e as mais conhecidas e criadas no Brasil são a Coturnix coturnix coturnix (europeias ou selvagens) e a Coturnix coturnix japonica (japonesas ou domésticas). Cada uma apresenta características específicas, que vão desde a diferenciação na coloração das penas e dos ovos até a aptidão na produção de carne ou na taxa de postura (OLIVEIRA, 2016). Dessa maneira, a codorna japonesa é mundialmente a espécie mais difundida e utilizada, principalmente para postura, devido à sua alta produção de ovos, enquanto a europeia é criada para corte, pois apresenta maior produção de carne (BAUNGARTNER, 1994). Embora existam ainda outras espécies de codornas, elas não são criadas em nível industrial. São consideradas nativas e para serem produzidas em cativeiro é necessário permissão do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis - IBAMA (ALBINO; BARRETO, 2003). A partir da década de 90 houve uma expansão do setor coturnícola, atraindo tecnologias e avançando na comercialização, sobretudo dos ovos, que antes eram vendidos somente in natura e passaram a ser processados (descascados ou em conserva), agregando valor ao produto. Tal expansão levou à incorporação de grandes empresas avícolas no setor (BERTECHINI, 2010; PIZZOLANTE et al., 2011; SANTOS, 2014). A criação de codornas é dividida basicamente em matrizeiros (produção de animais destinados a reprodução) e granjas comerciais especializadas em animais de corte ou postura. Quando comparada com a produção de galinhas poedeiras ou frangos de corte, apresenta vantagens por serem aves menores, não exigindo grandes espaços nas propriedades. Possuem desenvolvimento e ciclo produtivo acelerado, baixo consumo alimentar e fácil manejo. Portanto, a coturnicultura é considerada uma atividade propícia aos produtores que visam rápido retorno financeiro (ALBINO; BARRETO, 2003; MATOS, 2007).

19 Produção mundial e brasileira O Brasil ocupa a terceira posição mundial em produção de ovos de codorna, sendo que os maiores produtores são a China e o Japão, respectivamente. Já na América do Sul, o Brasil lidera em produtividade, seguido da Venezuela e Peru (BERTECHINI, 2013). Segundo o mesmo autor, é possível observar que a produção de ovos de codorna está relacionada com os principais polos de produção de ovos de galinha, resultado da exploração de mais de uma atividade pelos avicultores. De acordo com o Censo Agro 2017, do último levantamento estatístico realizado pelo Instituto Brasileiro de Geografia e Estatísticas (IBGE, 2017), o Brasil conta com um efetivo superior a 14,8 milhões de cabeças de codornas e mais de 17 mil estabelecimentos responsáveis pela produção, sem especificação sobre a finalidade produtiva (carne ou ovos). Ainda segundo a mesma pesquisa do IBGE (2017), o Sudeste se destaca em produtividade, seguido da região Sul. O estado de São Paulo é o maior produtor, acompanhado do Espírito Santo e Minas Gerais. Na sequência aparecem Santa Catarina, Paraná e, em sexto lugar, o Rio Grande do Sul. Em relação ao número de estabelecimentos, o primeiro colocado é o Rio Grande do Sul, enquanto que São Paulo está na oitava posição. Isso explica que os principais estados produtores contam com a maior parte dos animais, concentrados em menor número de propriedades. No Brasil, a criação de codornas para produção de ovos é maior do que para carne (MOTA et al., 2015), sendo que o país ocupa destaque no mercado agropecuário (SILVA; MIRANDA, 2009; BERTECHINI, 2013). Infelizmente não existem dados oficiais e atuais sobre a posição do Brasil neste setor produtivo e tampouco sobre o consumo per capita dos ovos de codornas. No entanto, Bertechini (2010) estimou que no ano de 2020 mais de 36 milhões de codornas estivessem alojadas, permitindo um consumo de 30 ovos per capita/ano. É notório que a coturnicultura brasileira vem se desenvolvendo nos últimos anos e passou de uma atividade familiar para produção comercial em grande escala, cada vez mais adepta ao uso de tecnologias. O aumento dos estudos científicos na área também é um dos responsáveis pelo crescimento dessa cadeia produtiva (BERTECHINI, 2010; BORDIN, 2016). Entre os principais avanços se destaca as

20 18 inovações nos programas alimentares, para atender as exigências nutricionais de acordo com cada fase produtiva, visando à qualidade do produto final, seja carne ou ovos (SILVA, 2014) Codorna japonesa: características produtivas Mundialmente a codorna japonesa é a principal espécie utilizada para a postura (LUCOTTE, 1982). No Brasil, é criada exclusivamente para a produção de ovos, devido as suas características positivas de produtividade (OLIVEIRA, 2016). A codorna japonesa destaca-se pela precocidade reprodutiva, iniciando a postura a partir dos 35 dias de vida. São aves que apresentam alta taxa de postura, chegando a produzir aproximadamente 300 ovos por ano em condições normais de alimentação e ambiência (BAUNGARTNER, 1994; MANDAL; SINEA; MISHRA, 1994; MILLS et al., 1994; BELO; COTTA; OLIVEIRA, 2000; SANTOS, 2003), sendo que o pico de produtividade ocorre por volta de 10 a 12 semanas após o início da postura (PIAO et al., 2004). São aves de pequeno porte e, quando adultas, podem pesar entre 120 e 160 g e medir em torno de 16 cm de altura (ALBINO; BARRETO, 2003). A diferenciação sexual só pode ser percebida a partir da segunda semana de vida, com o desenvolvimento das penas do peito, de modo que as fêmeas apresentam pintas pretas, as quais são inexistentes nos machos (SCHOFFEN-ENKE; DUTRA; FREITAS, 2005). As fêmeas são maiores e mais pesadas que os machos, sendo que somente estes cantam (ALBINO; NEME, 1998; BELO; COTTA; OLIVEIRA, 2000). A codorna japonesa é menor e apresenta maior produção de ovos quando comparada com a codorna europeia. O consumo alimentar também é menor e gira em torno de 23 a 26 g/ave/dia contra 30 a 36 g/ave/dia das codornas europeias (SILVA, 2014). Além disso, apresenta melhor conversão alimentar por dúzia de ovos quando comparada com outras poedeiras. É capaz de produzir 1 kg de ovo com menos de 2 kg de ração, enquanto que as galinhas precisam de até 2,5 kg de alimento para produzir a mesma quantidade de ovo (MINVIELLE, 2004). Também oferece maior quantidade de ovos produzidos/ciclo produtivo, pois o período de

21 19 formação do ovo de codorna é em média 20 horas, enquanto que das galinhas é em torno de 25 horas (ALBINO; BARRETO, 2003). A vida útil de uma codorna com boa postura é de um ano e, a partir de então, a produção é reduzida. Apesar de possuírem capacidade de postura até 18 meses (MURAKAMI; ARIKI, 1998), mantê-las no plantel até esse período não é uma alternativa rentável e o ideal é realizar a substituição por novas matrizes Criação e instalações Por serem aves de pequeno porte, apresentam vantagens em relação aos demais sistemas de produção, pois necessitam pequenos espaços e baixo investimento inicial (ALBINO; BARRETO, 2003; MATOS, 2007; SILVA et al., 2012). Dessa forma, a criação de codornas japonesas se torna um meio econômico e rentável (HEMID et al., 2010), responsável pelo aumento significativo no número de produtores interessados pela atividade, seja como renda extra, ou mesmo como atividade principal (SILVA et al., 2018). Albino e Barreto (2003) recomendam entre os sistemas de criação para as codornas japonesas em fase de postura, o uso de gaiolas em baterias, pela maior praticidade na realização dos manejos. Existem diferentes modelos de baterias no mercado, mas de maneira em geral, cada gaiola é equipada com comedouro, bebedouro, bandeja para coleta das excretas e apresenta piso inclinado com aparadores de ovos, evitando sujidades e perdas por perfurações Ambiência As codornas são animais resistentes e podem ser criadas em regiões frias a quentes (5 C a 30 C), logo, se adaptam com facilidade ao sistema de criação. Entretanto a faixa de conforto térmico para codornas na fase de postura é de temperaturas entre 18 C a 22 C e umidade entre 65 e 70% (ALBINO; BARRETO,

22 ). Quando em condições ideais a produção de ovos além de ser maior, se mantém constante (SILVA, 2014). Albino e Barreto (2003) relatam que os galpões mais simples podem ser de madeira com cortinas e tela anti-pássaros nas laterais (mais indicado para regiões quentes) ou com estrutura de alvenaria, completamente fechados e com controle de temperatura e umidade (para as regiões mais frias), mas também existem aviários totalmente automatizados. É importante que as aberturas laterais evitem a entrada de chuva e ventos fortes sobre as aves, mas permitam a renovação do ar, a fim de oferecer um ambiente de qualidade e bem-estar às aves. 2.2 Produção de ovos A partir dos 35 dias de idade, as codornas japonesas iniciam a postura, com uma produção que aumenta de forma linear até o pico de produção, considerando o período compreendido entre a 10ª e 12ª semana após surgirem os primeiros ovos (PIAO et al., 2004). Os ovos das codornas japonesas atingem um peso médio de 10 g (9 a 12 g), o que corresponde a 8% do seu peso corporal, e apresentam casca com coloração característica da espécie, exibindo manchas pigmentadas em tons de castanho por toda a superfície (ALBINO; BARRETO, 2003). Na produção de ovos para consumo, as codornas são criadas sem os machos, pois não se tem interesse em ovos férteis. A comercialização pode ser feita in natura ou processados, sendo os ovos em conserva os responsáveis pela maior parte do consumo (SANTOS, 2014). Nutricionalmente, o ovo é um alimento considerado completo, rico em proteína, com baixo teor de gordura, representada pela maior concentração de ácidos graxos insaturados (SARCINELLI; VENTURINI; SILVA, 2007). O ovo é também uma excelente fonte de carotenoides, como luteína, zeaxantina (BRULC et al., 2013), β-caroteno e cantaxantina (RUTH et al., 2011), além de ser uma das principais fontes de vitamina A (MÍNGUEZ-MOSQUERA; HORNERO-MÉNDEZ; PÉREZ-GÁLVEZ, 2002).

23 21 A pressão contínua da população sobre as mudanças nos hábitos alimentares exige cada vez mais estudos sobre a qualidade do produto ofertado, o que também influencia diretamente na aceitabilidade dos consumidores (FREITAS et al., 2011). Para uma maior qualidade dos ovos, são levadas em consideração as características desejadas pela população consumidora, produtores e processadores. Propriedades nutricionais e sanitárias, questões sobre a criação orgânica, bem-estar e preservação do meio ambiente, bem como as particularidades sensoriais, com destaque para a coloração da gema, são os principais requisitos trabalhados para atender essas exigências (ALLEONI; ANTUNES, 2001) Qualidade externa e interna do ovo São vários os fatores que influenciam na composição do ovo. Embora a idade das aves afete o tamanho do ovo e a qualidade da casca, não é responsável por nenhuma alteração em sua composição. Por sua vez, a alimentação que as aves recebem possui capacidade de modificar tanto a composição protéica e lipídica, como os compostos presentes na gema (MELO et al., 2015). Para a verificação da qualidade externa dos ovos, inicialmente são avaliados a aparência da casca, o peso do ovo inteiro (g) e a gravidade específica (g/cm 3 ), seguidos pela porcentagem de casca (%) e a sua espessura (mm). Para a qualidade interna, avalia-se a Unidade Haugh (UH), a coloração e porcentagem de gema e de albúmen. Visualmente, a casca do ovo é a principal variável externa avaliada pelos consumidores. O padrão é inteira e sem sujidades, a fim de evitar a entrada de micro-organismos (SARCINELLI; VENTURINI; SILVA, 2007; MAZZUCO, 2008). A qualidade da casca pode ser influenciada por inúmeros fatores, que vão desde a alimentação, características das aves (como idade, por exemplo), até mesmo falhas durante o manejo de coleta (NASCIMENTO; SALLE, 2003). O peso do ovo inteiro serve como avaliação do padrão de postura das aves, ou seja, serve como comparação com os padrões estabelecidos da linhagem (9 a 12 g para codornas japonesas), além de servir como relação na comparação com

24 22 outras variáveis avaliadas, como a porcentagem de casca, gema e albúmen (ALBINO; BARRETO, 2003). Para a qualidade da casca, o método mais comum é a análise da gravidade específica (HAMILTON, 1982). Sua realização é rápida e fácil, pois exige apenas soluções com diferentes concentrações salinas, onde os ovos são imersos e avaliados de acordo com a sua flutuação. Preconiza-se que a avaliação seja realizada em até 24 horas após a postura, e assim, ovos que flutuarem em soluções maiores apresentam melhor qualidade (ROBERTS, 2004). A porcentagem de casca é avaliada através da sua relação com o peso total do ovo. Valores desejados compreendem entre 8 e 11% (ORDÓNEZ, 2005). Segundo Araújo e Albino (2011), ovos com defeitos ou quebrados apresentam correlação negativa para essa variável e, portanto, para maior qualidade, maior deve ser o percentual de casca em relação ao peso do ovo. Já para a espessura da casca recomenda-se medir pelo menos três pontos diferentes do ovo (apical, basal e medial), considerando que a espessura da casca não é uniforme (BAIÃO; LARA, 2005). Em média, a casca dos ovos de codorna apresenta espessura de 0,183 mm (ALBINO; NEME, 1998). No momento da compra dos ovos, as características externas são levadas em consideração. No entanto, a qualidade interna também influencia, devido a uma maior padronização do produto, principalmente para consumidores que utilizam o ovo como matéria-prima para a fabricação de outros alimentos (OLIVEIRA, 2006; GARCIA et al., 2010). De maneira geral, o albúmen representa a porção proteíca e a gema a lipídica, onde se fazem presentes as vitaminas A, D, E, K e do complexo B (RAMOS, 2008; FAO, 2010). Mais conhecido como clara, o albúmen são camadas líquidas que circundam a gema (STADELMAN; COTERILL, 1977). Compreende uma relação de 56 a 61% do peso do ovo inteiro (ORDÓNEZ, 2005) e a sua qualidade é avaliada pela transparência, consistência e altura. O parâmetro mais utilizado para a avaliação do albúmen é a unidade Haugh (UH), que é uma expressão matemática que correlaciona o peso do ovo com a altura do albúmen espesso. Recebe este nome, pois foi Haugh (1937) quem desenvolveu um fator de correção para o peso do ovo e um logarítmo para altura do albúmen.

25 23 Para serem considerados de alta qualidade, após o cálculo, os ovos devem apresentar UH acima de 72, em valor absoluto (USDA, 2006). Em relação a gema, a qualidade é avaliada principalmente pela sua coloração, mas também pode ser mensurada através do parâmetro de sua porcentagem em relação ao peso total do ovo (SANTOS, 2008). Geralmente são encontrados valores que correspondem a 30% do peso do ovo inteiro (ORDÓNEZ, 2005). A nutrição que a ave recebe influencia diretamente na cor da gema, ou seja, os pigmentos presentes nos ingredientes adicionados à ração alteram a sua coloração. Os carotenoides são os principais pigmentos encontrados na gema e são capazes de direcionar a pigmentação, para mais clara (amarela) ou mais intensa laranja ao avermelhado (RAMOS, 2008). O mercado consumidor brasileiro relaciona tons mais alaranjados da gema com um produto mais saudável nutricionalmente, logo, na grande maioria das vezes, esta coloração é a preferencial quando comparada aos tons mais claros. Como a preferência dos consumidores é uma característica que dificilmente mudará, a utilização de pigmentos (sintéticos e/ou naturais) é uma realidade na formulação das dietas para aves (ARAÚJO, 2016). 2.3 Nutrição animal A nutrição influencia diretamente o desempenho zootécnico dos animais e as condições nutricionais ofertadas durante as fases iniciais podem refletir no desempenho das aves durante a fase produtiva (BRUXEL, 2016). O autor explica ainda que, devido à precocidade sexual das codornas, atender as exigências nutricionais é extremamente importante para que não ocorram problemas na fase de postura, como por exemplo, queda produtiva e/ou produção de ovos defeituosos. As codornas japonesas devem receber dietas específicas para a produção de ovos, com destaque para os teores de cálcio e proteína (SILVA et al., 2012). Assim, a formulação das dietas deve atender todos os nutrientes essenciais e necessários para suprir tanto as exigências de desempenho quanto de produção. Para codornas japonesas, as referências nutricionais se baseiam basicamente no National Research Council (NRC, 1994), Tabelas para Codornas Japonesas e Europeias

26 24 (SILVA; COSTA, 2009) e nas Tabelas Brasileiras para Aves e Suínos (ROSTAGNO et al., 2017). Animais criados em sistemas intensivos, como é o caso das codornas, dependem exclusivamente das dietas ofertadas, ou seja, a ração é a fonte principal de nutrientes (UMIGI; BARRETO; DONZELE, 2007). No entanto, é também o fator responsável pelo maior custo da atividade. As fontes proteicas representam a maior parcela dos gastos com a alimentação e o farelo de soja é o principal ingrediente proteico nas dietas de não ruminantes, responsável por até 30% nos custos das rações (MANTOVANI et al., 2000). Levando em consideração que as dietas das codornas contêm mais proteína do que as rações de frangos de corte e poedeiras, consequentemente, o custo de alimentação das codornas por unidade de ovos é maior (SILVA et al., 2012). Por isso, cabe aos nutricionistas optarem cada vez mais pela economicidade da cadeia produtiva e, através da formulação das dietas, adequar a necessidade de ingredientes de acordo com as exigências nutricionais de cada categoria e fase produtiva (MOURA et al., 2010). Dada a crescente demanda por proteína na dieta e a produção geograficamente concentrada de soja, novas fontes de proteína vegetal são continuamente procuradas (BROUWER et al., 2019). 2.4 Macrófitas aquáticas como alternativa alimentar Com a finalidade de encontrar novas opções alimentares, cada vez mais são pesquisados alimentos alternativos e as plantas aquáticas têm demonstrado interesse, pois se apresentam distribuídas em diversos ambientes aquíferos (FINLAYSON, 1984). No mundo e particularmente na Ásia, os agricultores produzem e colhem plantas aquáticas para diferentes fins, incluindo como fonte de alimento animal na nutrição de aves (ISLAM; NISHIBORI, 2017). As macrófitas aquáticas (macro = grande; fita = planta), são formas macroscópicas de vegetação aquática (WETZEL, 1993). Dependendo da espécie, podem ser submersas em água ou flutuantes na superfície, fixas ou livres e se apresentarem de maneira sazonal (em apenas alguns meses do ano) ou perene,

27 25 dependendo da adaptabilidade ao meio aquático (COOK, 1974; ESTEVES, 1998). De maneira geral, apresentam grande capacidade de adaptação, facilitando a sua ampla distribuição geográfica pelo mundo. Somente alguns gêneros, e algumas famílias, têm distribuição mais restrita (MITCHELL, 1974). As plantas aquáticas são alternativas interessantes às fontes convencionais de alimentos, principalmente devido ao seu crescimento acelerado e qualidade de nutrientes (LETERME et al., 2009). Dessa forma, vários estudos foram realizados para determinar o seu valor nutricional, para uso na nutrição animal e, assim, ser utilizada como uma nova fonte de proteína na alimentação (ALALADE; IYAYI, 2006; HENRY-SILVA; CAMARGO; PEZZATO, 2006; LETERME et al., 2010; RAJA et al., 2012; SHALTOUT; EL-KOMI; EID, 2012; KOLLAH; PATRA; MOHANTY, 2016; KUMARI et al., 2018). No Brasil, as macrófitas aquáticas são bem distribuídas pelos ecossistemas aquáticos. Irgang e Gastal Jr. (1996) registraram cerca de 400 a 500 espécies no estado do Rio Grande do Sul, habitando diferentes corpos d água. Vários autores descrevem a ocorrência de espécies dos gêneros Azolla, dentre eles a Azolla filiculoides Lam (CORDAZZO; SEELIGER 1995; ROLON; MALTCHIK; IRGANG, 2004; PEREIRA; TRINDADE; PALMA-SILVA, 2008) Azolla O gênero Azolla pertence a ordem das pteridófitas (Pteridophyta) e é o único da família Azollaceae (WAGNER, 1997). As suas plantas são mais comumentemente conhecidas como samambaias d água e se classificam em sete espécies com distribuição global: Azolla caroliniana, Azolla filiculoides, Azolla mexicana, Azolla microphylla, Azolla nilotica, Azolla pinnata e Azolla rubra. Destas, até então, apenas três, Azolla caroliniana, filiculoides e pinnata foram encontradas no Brasil e estão presentes nos diferentes estados brasileiros, entre eles o Rio Grande do Sul (VAN HOVE; LEJEUNE, 2002). O nome do gênero é derivado das palavras gregas Azo (seco) e ollya (matar), logo, as plantas são mortas pela seca e, portanto, exigem ambientes úmidos e com presença de água para permanecerem vivas (YADAV et al., 2014).

28 26 A variação no crescimento, bem como na composição bromatológica, ocorre como nas demais plantas e se deve, principalmente, às condições ambientais como temperatura, intensidade de luz, nutrientes disponíveis, época do ano e local do cultivo (CAMARGO; MARIN; CAMARGO, 2003; BROUWER et al., 2018). Em condições favoráveis, o crescimento excessivo pode formar imensos tapetes verdes (PEREIRA; VASCONCELOS, 2014). É uma planta de fácil adaptação e devido ao seu rápido desenvolvimento e reprodução, também é considerada uma invasora, pois em condições ideais, a capacidade de duplicação da sua biomassa ocorre em aproximadamente dois a quatro dias (PABBY; PRASANNA; SINGH, 2004; LEWANDOWSKI et al., 2016). E, por isso, o manejo de controle sobre o seu crescimento é fundamental, a fim de evitar a dominância sobre as demais espécies aquáticas existentes ou até mesmo a sua morte gerada pela falta de oxigenação (BROUWER et al., 2018). Segundo Esteves e Camargo (1986) as macrófitas aquáticas do gênero Azolla apresentam uma variação sazonal em regiões temperadas, de acordo com a temperatura e fotoperíodo. Já Ferentinos, Smith e Hector (2002) relataram que temperaturas entre 18 C e 28 C são as mais recomendadas para o melhor desenvolvimento das plantas. Temperaturas menores ou maiores diminuem gradativamente a produtividade. Os mesmos autores afirmam que esta planta tem capacidade de sobreviver em uma escala de ph entre 3,5 a 10, mas apresenta melhor crescimento na faixa de 4,5 a 7. Em relação à economia, pesquisas realizadas com essa planta demonstram a sua alta viabilidade, uma vez que não exigem tecnologias complicadas e, desta maneira, facilitam a sua utilização por pequenos produtores rurais (HENRY-SILVA, CAMARGO; PEZZATO, 2006; ALDÁS et al., 2016)

29 Azolla filiculoides Lam. A Azolla filiculoides, em particular, teve a sua primeira descrição por Lamarck e, portanto, sua nomenclatura completa é Azolla filiculoides Lam. (LAMARCK, 1783). Apresenta flutuação livre e se desenvolve em reservatórios de água doce (WAGNER, 1997; FORNI et al., 2012). Cresce tanto flutuando, como fixa nas margens de canais e lagoas, principalmente em águas calmas. Comparada com outras espécies vegetais, se desenvolve muito bem em ambientes poluídos (KONDO; KOBAYASHI; TAKAHASHI, 1989) Características da espécie Seu formato é poligonal ou triangular, medem até 2,5 cm e são heterosporadas, ou seja, apresentam esporos femininos e masculinos (LUMPKIN; PLUCKNETT, 1980). As plantas flutuam individualmente ou em grupos, conforme a direção dos ventos e são compostas por folhas e raízes. As folhas são pequenas, sobrepostas e dispostas em camadas, muito parecidas com escamas e ficam emersas na água (Figura 1), enquanto as raízes são submersas e ficam penduradas (SVENSON, 1944; CARRAPIÇO; PEREIRA; RODRIGUES, 2007).

30 28 Figura 1 Fotografia. Macrófita aquática Azolla filiculoides Lam. Fonte: Acervo pessoal. A coloração de suas folhas é geralmente verde-escura, porém, a exposição direta ao sol ou baixas temperaturas, pode ocasionar a alteração da cor, geralmente para vermelho ou marrom, devido ao estresse gerado na planta, resultado da produção de antocianinas, pigmento responsável pela mudança de tonalidade (MOORE, 1969; WATANABE; LIU, 1992; WAGNER, 1997; JANES 1998). Adalberto et al., (2004) relataram ainda que a deficiência de fósforo causa falência generalizada do metabolismo da planta, originando o avermelhamento das folhas. Quando aglomeradas, podem formar imensos tapetes contínuos que cobrem toda a superfície d água (MCCONNACHIE et al., 2003). Esta mesma particularidade a torna uma competidora com as demais plantas aquáticas, chegando a ser considerada uma planta invasora (CARRAPIÇO; TEIXEIRA; DINIZ, 2000), pois ao cobrir toda a área, acaba limitando a oxigenação das outras espécies. Uma das suas principais características é ser o único gênero das pteridófitas que apresenta associação simbiótica com uma alga verde-azul (Anabaena azollae), presente no lobo dorsal das suas folhas (CARDOSO; TSAI; NEVES, 1992; VAN HOVE; LEJEUNE, 2002; ARORA; SINGH, 2003; PEREIRA et al., 2006), responsável pela fixação de nitrogênio atmosférico e, portanto, dispensam a necessidade de adubação nitrogenada inorgânica (ASHTON, 1992).

31 Crescimento e reprodução Apresentam crescimento natural em açudes, lagoas, corpos d água e rios de água doce (CHATTERJEE et al., 2013) e a propagação geralmente é feita por fragmentação de talo (SINGH; SINGH, 1995). O crescimento acelerado é característico da ação simbiótica, em que as algas são responsáveis pela transformação do nitrogênio fixado em nitrito (forma com que as plantas podem utilizá-lo a fim de garantir suas exigências). Em contrapartida, a planta oferece abrigo e carbono na forma de sacarose para as algas (VAN HOVE; LEJEUNE, 2002). Esta simbiose faz com que a Azolla filiculoides possua capacidade de crescer em ambientes aquáticos com deficiência de nitrogênio na água (KITOH; SHIOMI; UHEDA, 1993; COSTA; SANTOS; CARRAPIÇO, 1999). Adicionalmente Maejima et al. (2001) relatam que a reprodução das plantas é reduzida na falta de nitrogênio disponível e Kathirvelan, Banupriya e Purushothaman (2015), afirmam que a utilização de adubação nitrogenada inorgânica no seu cultivo pode ser dispensada. No entanto, a oferta de adubo orgânico acelera o processo produtivo Principais utilizações Devido ao crescimento acelerado e com elevadas taxas de fixação de nitrogênio, a Azolla filiculoides passou a substituir o uso de fertilizantes minerais em arrozais na Ásia (BISWAS et al., 2005). Portanto, por muito tempo a sua principal utilização se baseava apenas como adubação vegetal, principalmente nas plantações de arroz irrigado (SHIOMI; KITOH, 2001) e os estudos se mantinham nesta área, avaliando a sua utilização como biofertilizante (LUMPKIN; PLUCKNETT, 1980; WAGNER, 1997; MACALE; VLEK; SAN VALENTIN, 2002). Posteriormente, devido ao seu alto valor nutritivo, a sua inclusão na nutrição animal despertou interesse e foi avaliado o potencial de utilização da sua biomassa na alimentação animal (in natura ou desidratada na forma de suplemento), tanto

32 30 para ruminantes como para não ruminantes (ALBERTONI; PALMA-SILVA; VEIGA, 2005; BHASKARAN; KANNAPAN, 2015). Diferentes autores destacaram a utilização da Azolla como fonte proteica na dieta de coelhos (GUALTIERI; RAPACCINI; BALLONI, 1988; SADEK et al., 2010), suínos (DURAN, 1994; LETERME et al., 2010), peixes (SOUZA et al., 2008; ARNAULD et al., 2017; MÉNDEZ-MÁRTINEZ et al., 2018; MÉNDEZ-MÁRTINEZ et al., 2019) e bovinos (KHARE et al., 2014). Adicionalmente, Pott e Pott (2000) destacaram como características o fato de serem utilizadas também como plantas forrageiras para aves (RAI et al., 2012; SINHA; KUMAR; CHUDHARY, 2018). Embora exista uma série de estudos realizados com galinhas poedeiras (SUBUDHI; SINGH, 1978; ALALADE; IYAYI; ALALADE, 2007; SUJATHA et al., 2013), patos (BACERRA; PRESTON; OGLE, 1995), frangos (BASAK et al., 2002; BALAJI et al., 2009; PRABINA; KUMAR, 2010; NAGHSHI; KHOJASTEH; JAFARI, 2014; ARA et al., 2015; KASHYAP et al., 2018; KUMAR et al., 2018) e codornas japonesas (PARASELLI, 2013; SHAMNA et al., 2013; RATHOD et al., 2013; PARVEZ et al., 2018; TUGIYANTI; HERIYANTO, 2018), os mesmos se referem a inclusão de outras espécies de Azolla na dieta, principalmente a Azolla pinnata. É importante destacar que a maior utilização da Azolla filiculoides, em particular, ainda é na produção agrícola, como adubo vegetal (RAZAVIPOUR et al., 2018; SULANDJARI; YUNINDANOVA, 2018; OYANGE et al., 2019; SIVANESON; PONNEGIPPENTHIRARAJA, 2019) Composição nutricional A utilização de um ingrediente alternativo natural na alimentação animal exige conhecimento sobre a sua composição físico-química, bem como a sua digestibilidade (OLIVEIRA; SANTOS; CUNHA, 2014). Conforme descrito anteriormente, a preocupação a respeito da presença de fatores antinutricionais capazes de limitar a digestibilidade dos nutrientes ou mesmo causar efeitos tóxicos aos animais, também deve ser levada em consideração, pois caso necessário devese utilizar técnicas nutricionais que visam melhorar ou inativar este problema (SILVA et al., 2018).

33 31 Em ingredientes de origem vegetal, os principais fatores antinutricionais se referem aos compostos presentes na parede celular das plantas, visto a baixa capacidade dos monogástricos em digerir e absorver a fibra (ANDRADE et al., 2015). Os resultados sobre o desempenho animal e qualidade do produto final são decisivos para a escolha da inclusão ou não do ingrediente estudado (GOBESSO et al., 2017). O conhecimento sobre o valor energético dos alimentos, a fim de estimar a quantidade de energia disponível na ração também é fundamental para a formulação das dietas (SILVA; COSTA, 2009; ROSTAGNO et al., 2017). Particularmente, quando se trabalha com um ingrediente alternativo de pouco uso na nutrição animal e cujo valor de energia metabolizável não é conhecido, torna-se necessário realizar um ensaio prévio de digestibilidade com os animais, para que se possa determinar quanto de energia o alimento tem a oferecer. A energia, em forma de calor, é produzida após os processos de oxidação dos alimentos ingeridos. Os carboidratos, os lipídios, os aminoácidos e parte da fibra são responsáveis pelo fornecimento de energia para os processos metabólicos. No entanto, nem toda energia produzida é aproveitada pelo organismo (SAKOMURA; ROSTAGNO, 2016). A energia bruta (EB) é o total de energia produzida pelo processo de oxidação. A energia absorvida após o processo de digestão é chamada de energia digestível (ED), que pode ser calculada através da diferença entre a energia bruta do alimento consumido pelo valor excretado nas fezes. Entretanto, para aves, essa forma de energia não é utilizada, por não excretarem fezes e urina separadas (SIBBALD, 1982). Segundo Sakomura e Rostagno (2016), para a formulação das dietas de monogástricos, a energia utilizada como referência é o valor de energia metabolizável (EM), obtida através da diferença do valor de EB do alimento ingerido e a EB das excretas (fezes e urina). Existem diferentes formas de determinação da EM, sendo uma delas a energia metabolizável aparente (EMA), através do método tradicional de coleta total de excretas (SIBBALD; SLINGER, 1963), que se baseia em mensurar o total de alimento consumido e o total de excretas produzidas em determinado período. O ensaio de digestibilidade visa quantificar o valor energético de um alimento e para isso são utilizadas duas dietas, uma como referência (com ingredientes

34 32 utilizados nas formulações comerciais) e outra teste (com a inclusão de uma porcentagem do ingrediente a ser estudado, em substituição a dieta referência). Quanto maior a proporção de inclusão do alimento, maior a precisão da determinação, porém, o nível de inclusão depende do tipo de alimento a ser testado. Normalmente são utilizados níveis de 20 a 40% para alimentos sólidos e de 7 a 10% para os líquidos (SAKOMURA; ROSTAGNO, 2016). Freitas, Sakomura e Neme (2004) analisaram ainda a importância de levar em consideração os níveis de fibra do alimento, justificando a redução da digestibilidade e o aumento da taxa de passagem, recomendando substituir no máximo 20% para alimentos fibrosos. A composição bromatológica da Azolla é variável, sofrendo influência do ambiente onde são cultivadas. O percentual de proteínas e o perfil de aminoácidos essenciais recebe destaque em todos os trabalhos que avaliaram a sua utilização como ingrediente na dieta animal (ALALADE; IYAYI, 2006; ACCODJI; FIOGBE; GANGBAZO, 2009; LETERME et al., 2009; BHASKARAN; KANNAPAN, 2015). Bhattacharyya et al. (2016) afirmam que podem ser encontrados valores entre 25 a 30% de proteína bruta na Azolla. Além disso, a planta apresenta baixo teor de lignina e diversos micronutrientes promotores de crescimento, tornando-se uma provável alternativa para a alimentação dos animais (PARASHURAMULU; SWAIN; NAGALAKSHMI, 2013). Com o intuito de reduzir os custos e atender um mercado cada vez mais exigente, o uso das macrófitas aquáticas vem se tornando uma realidade cada vez mais frequente em estudos relacionados com a nutrição de aves. Fontes proteicas de baixo custo e alta qualidade, com o equilíbrio adequado de aminoácidos, despertam interesse e a sua inclusão nas dietas deve ser avaliada (GARCIA; BATAL; BAKERT, 2006; RAI et al., 2012; KASHYAP et al., 2018; JOYSOWAL et al., 2018; SINHA; KUMAR; CHUDHARY, 2018).

35 3 Material e métodos 3.1 Aprovação ética O experimento foi aprovado pela Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEEA) da Universidade Federal de Pelotas, sob o número Cultivo da Azolla filiculoides Mudas da Azolla filiculoides foram coletadas em uma propriedade rural do município de Morro Redondo/RS. Para o seu cultivo, foi construído um tanque escavado, medindo 30 m 2, com 0,5 m de profundidade, conforme a Figura 2, localizado no Setor de Avicultura do Laboratório de Ensino e Experimentação Zootécnica Professor Renato Rodrigues Peixoto, do Departamento de Zootecnia (DZ) da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel (FAEM) da Universidade Federal de Pelotas (UFPel), localizado no município de Capão do Leão/RS. Para maior multiplicação das mudas, semanalmente o tanque era adubado com matéria orgânica de origem animal (esterco bovino). A partir da estabilidade na produção, a adubação passava a ser conforme a necessidade, avaliada através da visualização na alteração de cor das folhas (de verde para avermelhada), seguindo as recomendações de Kathirvelan, Banupriya e Purushothaman (2015).

36 34 Figura 2 Fotografia. Tanque para cultivo da macrófita aquática Azolla filiculoides. Fonte: Acervo pessoal. Devido à perda por infiltração e/ou evaporação, a água do tanque era reposta sempre que necessário e o ph da água era analisado a cada 15 dias, com phmetro digital. Durante o período de verão, para maior proteção das plantas em relação aos raios solares, utilizou-se tela sombrite, sendo removida no inverno. 3.3 Produção da farinha de Azolla filiculoides Conforme o desenvolvimento das novas mudas fazia-se colheita manual, com auxílio de uma peneira, a qual também servia para a retirada do excesso de água. Posteriormente, a biomassa passava por um processo de limpeza, com separação de qualquer material estranho. Então, era realizadada a pré-secagem em estufa de ventilação de ar forçado, a 60 C por 72 horas. Para a produção da farinha, o material seco era moído em moinho de facas com peneira de 1 mm. A quantidade produzida era pesada e armazenada sob refrigeração até o momento do seu uso na produção das dietas. Conforme pode ser observado na Figura 3, devido a grande quantidade de água presente no material colhido, o volume de farinha produzida era bem inferior ao da biomassa colhida.

37 35 Figura 3 Fotografia. Volume da biomassa da Azolla filiculoides colhida, pré-seca e moída. Fonte: Acervo pessoal. 3.4 Análise bromatológica da farinha de Azolla filiculoides A partir da pré-secagem, foi realizada secagem definitiva em estufa por 24 horas a 105 C, para analisar os teores de umidade e matéria seca (MS) através de cálculo da perda de peso após a secagem. Para as análises de proteína bruta (PB), extrato etéreo (EE), fibra bruta (FB), fibra detergente neutra (FDN), fibra detergente ácida (FDA) e extrato não nitrogenado (ENN) seguiram-se os métodos de Weende (AOAC 1975) e Van Soest (AOAC 1990). Para a matéria mineral (MM), foi realizada a queima da amostra em mufla a 550 C por 24 horas. Essas análises foram feitas no Laboratório de Nutrição Animal do DZ da FAEM UFPel Capão do Leão/RS. A análise da composição mineral foi realizada no Laboratório de Análise de Plantas e Resíduos Orgânicos, do Departamento de Solos da FAEM UFPel Capão do Leão/RS. 3.5 Ensaio de digestibilidade A fim de quantificar o valor energético da Azolla filiculoides, foram utilizadas duas dietas para as codornas japonesas em postura, uma referência (a base de

38 36 milho e farelo de soja) e a outra com substituição de 20% da dieta pela farinha de Azolla filiculoides, conforme Freitas, Sakomura e Neme (2004). As dietas foram ofertadas à vontade durante dez dias e o ensaio de digestibilidade ficou dividido em cinco dias para adaptação e cinco dias para a coleta das excretas. A oferta e as sobras das dietas foram pesadas no início e ao final do período de coleta para calcular o consumo de ração por unidade experimental. Fezse o uso de marcador indigestível (óxido férrico 2%) nas dietas, para definição do primeiro e do último dia de coleta total das excretas, segundo a metodologia de Sibbald e Slinger (1963). Diariamente, as excretas coletadas foram acondicionadas em sacos plásticos identificados e congeladas, a fim de evitar fermentação. Ao final do período, foram descongeladas, homogeneizadas, secas em estufa de ventilação de ar forçado, a 60 C por 72 horas e moídas em moinho de facas com peneira de 1 mm. Amostras das dietas experimentais também foram moídas para a realização da análise bromatológica (AOAC 1975; AOAC 1990) e de energia bruta. Para a avaliação da energia bruta do alimento e das excretas foi utilizado um colorímetro de bomba isoperibólico, modelo C2000, no Laboratório de Nutrição Animal do DZ da Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS, Porto Alegre/RS. Com base nos valores de consumo de ração, produção de excretas, análise bromatológica e valor da energia bruta das dietas e excretas, a EMA do alimento pode ser estimada. Para o cálculo, foram utilizadas as equações elaboradas por Matterson et al. (1965): EMA da ração referência = EB ingerida EB excretada MS ingerida EMA da ração teste = EB ingerida EB excretada MS ingerida EMA do alimento = EMA referência + EMA teste EMA referência g de alimento / g de ração

39 Formulação das dietas As dietas foram formuladas para atender às necessidades nutricionais de codornas japonesas em postura considerando os níveis recomendados por Silva e Costa (2009) e Rostagno et al. (2017) e foram divididas em cinco tratamentos (Tabela 1), um com a dieta controle à base de milho e farelo de soja e os demais compostos pela adição da farinha de Azolla filiculoides em níveis. Tabela 1 Composição centesimal e níveis nutricionais calculados das dietas com farinha de Azolla filiculoides para codornas japonesas em postura. Ingredientes Farinha de Azolla filiculoides (%) Milho moído (7% PB) 51,000 50,234 49,802 49,000 48,740 Farelo de soja (45% PB) 36,174 35,340 34,000 33,050 31,520 Farinha de Azolla filiculoides (31% PB) 0,000 2,000 4,000 6,000 8,000 Calcário calcítico (35%Ca) 7,229 7,229 7,220 7,220 7,180 Fosfato bicálcico (24%Ca; 19%P) 1,238 1,238 1,238 1,220 1,210 Óleo de soja 2,800 2,860 2,700 2,580 2,420 Cloreto de sódio 0,540 0,480 0,420 0,310 0,310 Suplemento vitamínico e mineral 1 0,500 0,500 0,500 0,500 0,500 DL-metionina 0,380 0,120 0,120 0,120 0,120 L-lisina 0,140 0,000 0,000 0,000 0,000 Total 100, , , , ,000 Nutrientes Composição calculada (%) Energia metabolizável (kcal/kg) Proteína bruta 20,788 20,681 20,656 20,779 20,682 Cálcio 3,162 3,171 3,176 3,173 3,171 Fósforo digestível 0,305 0,302 0,298 0,292 0,287 Fósforo disponível 0,328 0,331 0,333 0,332 0,332 Fósforo total 0,550 0,558 0,564 0,568 0,572 Potássio 0,825 0,863 0,893 0,928 0,955 Sódio 0,227 0,233 0,240 0,234 0,256 Cloro 0,386 0,349 0,312 0,257 0,244 Metionina digestível 0,652 0,391 0,383 0,376 0,367 Metionina + cisteína digestível 0,929 0,663 0,646 0,633 0,615 Lisina digestível 1,124 0,993 0,958 0,993 0,893 Arginina digestível 1,298 1,270 1,227 1,195 1,146 Fenilalanina digestível 0,935 0,915 0,885 0,862 0,829 Fenilalanina + tirosina digestível 1,655 1,620 1,567 1,567 1,468 Glicina + serina digestível 1,669 1,633 1,579 1,539 1,479 Histidina digestível 0,387 0,378 0,364 0,354 0,337 Isoleucina digestível 0,806 0,789 0,762 0,742 0,713 Leucina digestível 1,596 1,563 1,517 1,480 1,430 Treonina digestível 0,701 0,686 0,665 0,648 0,624 Triptofano digestível 0,237 0,232 0,224 0,218 0,209 Valina digestível 0,864 0,845 0,817 0,796 0,766 1 Composição por quilo de produto: Vitamina A: UI; Vitamina D 3: UI; Vitamina E: 5400 UI; Vitamina K 3: 300 mg; Vitamina B 1: 300 mg; Vitamina B 2: 1400 mg; Vitamina B 6: 600 mg; Vitamina B 12: 4000 μg; Niancina: 6400 mg; Pantotenato de Cálcio: 2600 mg; Ácido fólico: 400 mg; Biotina: 20 mg; Cloreto de colina: 66 g; Fitase: FTU; Xilanase: μg; Betaglucanase: μg; Halquinol: 6000 μg; Lisina: 140 g; Metionina: 250 g; Ferro: 7200 mg; Cobre: 1800 mg; Manganês: 14 g; Zinco: 14 g; Iodo: 288 mg; Selênio: 65 mg. Produto utilizado: Poli-Tec codornas, fornecido pela empresa Polinutri Alimentos S.A.

40 38 As dietas foram formuladas com o auxílio do programa SuperCrac, versão 6.1 (SuperCrac Premium, 2019). Os valores de aminoácidos presentes na farinha de Azolla filiculoides também foram levados em consideração para a formulação das dietas. Foi utilizado como referência o estudo realizado por Bhaskaran e Kannapan (2015) e os dados estão apresentados na Tabela 2. Tabela 2 Composição dos aminoácidos, em base seca, da farinha de Azolla filiculoides. Nutriente (%) Farinha de Azolla filiculoides Metionina 0,52 Lisina 12,82 Treonina 6,56 Valina 6,93 Leucina 9,24 Isoleucina 6,02 Fenilalanina 4,66 Tirosina 0,34 Serina 7,83 Prolina 1,43 Glicina 7,57 Alanina 6,81 Cisteína 0,00 Histidina 3,21 Arginina 2,32 Triptofano 2,00 Ácido aspártico 10,46 Ácido glutâmico 11,28 Aminoácidos essenciais 48,75 Aminoácidos não-essenciais 51,25 Fonte: Adaptado de Bhaskaran e Kannapan (2015). 3.7 Níveis de inclusão da farinha de Azolla filiculoides A escolha dos níveis de inclusão da farinha de Azolla filiculoides limitou-se a 8%, a fim de oferecer um nível máximo seguro e sem riscos de efeito tóxico, pois verificou-se na literatura o uso de Azolla pinnata na dieta de codornas, em níveis de até 7,5%, sem efeitos negativos sobre o desempenho e a saúde das aves (PARASELLI, 2013; SHAMNA et al., 2013; RATHOD et al., 2013; PARVEZ et al., 2018; TUGIYANTI; HERIYANTO, 2018). Também é importante observar que os níveis escolhidos são crescentes e igualmente espaçados, levando-se em consideração o delineamento estatístico escolhido.

41 39 Assim, os tratamentos utilizados foram descritos da seguinte forma: T1 dieta controle (sem Azolla filiculoides), T2 2%, T3 4%, T4 6% e T5 8% de inclusão da farinha de Azolla filiculoides. 3.8 Produção das dietas experimentais Todos os ingredientes foram pesados individualmente em balança digital e as dietas foram preparadas na ordem do menor até o maior nível de inclusão da farinha de Azolla filiculoides. Para o preparo, inicialmente foi realizada uma pré-mistura com os microingredientes (fosfato bicálcico, cloreto de sódio, premix mineral e vitamínico, metionina e lisina) e o óleo de soja foi misturado com uma parte do farelo de soja. Cada dieta foi preparada com a inclusão dos ingredientes (milho moído, farelo de soja e calcário) em misturador automático tipo Y, adicionando-se as pré-misturas. O tempo de homogeneização para cada dieta foi de 12 minutos. Foi realizada uma mistura para cada tratamento, totalizando 100 kg, volume necessário para alimentar as aves durante todo o período experimental. Após a mistura, cada dieta foi armazenada separadamente em baldes de polietileno, identificados e armazenados na sala experimental. Aos domingos eram pesadas as quantidades totais correspondentes à oferta da próxima semana para cada tratamento e repetição, sendo então armazenadas em baldes menores. Cada ave recebia diariamente 30 g de ração (Figura 4) e as sobras eram retiradas e pesadas ao final de cada semana.

42 40 Figura 4 Fotografia. Volume de ração ofertada diariamente para cada ave. Fonte: Acervo pessoal. 3.9 Local e duração do experimento A pesquisa foi executada no Setor de Avicultura do Laboratório de Ensino e Experimentação Zootécnica Professor Renato Rodrigues Peixoto (31 48'30,8"S 52 24'40,7"O) do DZ FAEM UFPel, Capão do Leão/RS. Foi utilizada uma sala experimental própria para a produção de codornas, composta com estrutura de alvenaria e utilização de gaiolas metálicas em baterias. A sala contou com ambiente climatizado e controle de iluminação. As instalações e os equipamentos passaram por limpeza e desinfecção e todos os aparelhos foram testados anteriormente à introdução das aves. O período experimental compreendeu 28 dias, durante os meses de novembro e dezembro de Animais experimentais Foram utilizadas 100 codornas japonesas (Coturnix coturnix japonica) entre a 12ª e 16ª semana de postura. As aves foram adquiridas de uma granja comercial.

43 Manejos Os manejos foram realizados diariamente, sempre no mesmo horário, com o preenchimento de um checklist para o registro de qualquer irregularidade e consequentemente avaliação sobre o desempenho zootécnico dos animais. Todas as aves foram submetidas às mesmas condições ambientais e de manejo, de acordo com Rostagno et al. (2011) Pesagem, identificação e alojamento das aves No primeiro dia do experimento, cada codorna foi pesada e identificada com anilha numerada (Figura 5). As aves foram divididas conforme faixa de peso e distribuídas inteiramente ao acaso entre os tratamentos. Foram alojadas em gaiolas metálicas medindo 0,15 m 2, dispostas em baterias com cinco andares (Figura 6). Figura 5 Fotografia. Identificação individual das aves com uso de anilha numérica. Fonte: Acervo pessoal.

44 42 Figura 6 Fotografia. Gaiolas metálicas dispostas em baterias para a criação de codornas. Fonte: Acervo pessoal. As aves foram colocadas duas a duas em cada gaiola, que continha comedouro manual do tipo calha na parte frontal e bebedouro automático do tipo nipple ao fundo Iluminação, temperatura e umidade Durante todo o período experimental as aves receberam iluminação através de lâmpadas fluorescentes, com oferta de 17 horas diárias de luz entre as 5:00 e as 22:00 horas, controlada por relógio timer, conforme Gewehr (2003). Para manter o ambiente climatizado, foi utilizado aparelho de ar condicionado e o sistema de ventilação natural era feito através de janelas reguláveis e portas teladas. A temperatura e a umidade relativa do ar do interior do aviário foram conferidas diariamente com o uso de três termohigrômetros digitais, localizados nas extremidades e no centro das gaiolas. Foram anotados os valores no momento do manejo, a máxima e mínima das últimas 24 h, sempre no mesmo horário e antes da

45 43 realização dos demais manejos. As médias registradas para a temperatura e umidade relativa do ar foram 22,8 C e 58,7%, respectivamente Oferta alimentar As dietas e a água foram oferecidas à vontade durante todo o período experimental. As sobras de ração eram retiradas e pesadas semanalmente e os bebedouros eram limpos diariamente Variáveis analisadas Foram avaliadas as variáveis de desempenho zootécnico (peso corporal, produção de ovos, consumo de ração, conversão alimentar), mortalidade, digestibilidade aparente, qualidade interna e externa dos ovos, análise sensorial dos ovos, biometria da carcaça e órgão, morfometria histológica intestinal das aves e análise econômica das dietas Peso das aves As codornas foram pesadas individualmente no início do período experimental e repesadas semanalmente para o acompanhamento do peso corporal e da conversão alimentar por unidade experimental. Foi utilizada balança digital com precisão de 0,05 g.

46 Produção de ovos A produção de ovos foi registrada diariamente por unidade experimental. Calculou-se o total de ovos viáveis produzidos no período através da taxa de postura (%), produção de ovos em dúzias (dz), peso do ovo inteiro (g) e massa de ovos (g/ave/dia). Para o cálculo do total de ovos produzidos foi realizado o somatório apenas dos ovos íntegros coletados em cada gaiola durante todo o período. Foram descartados os ovos defeituosos (sem pigmentação, perfurados ou sem casca). A taxa de postura foi calculada em porcentagem, utilizando-se o número total de ovos produzidos e os dias de duração do experimento. Para a produção de ovos, em dúzias, foi dividido o total de ovos produzidos por 12. Os ovos foram pesados diariamente em balança analítica de precisão (0,01 g). A massa de ovos foi obtida pelo peso médio dos ovos e a taxa de postura, com o objetivo de avaliar quantas gramas de ovo cada ave produziu ao dia, conforme a seguir: Taxa de postura (%) = (ovos produzidos no período * 100) número de dias do período Dúzias de ovos (dz) = ovos produzidos no período 12 Massa de ovos (MO) = (peso médio dos ovos * taxa de postura) Consumo de ração e conversão alimentar O consumo de ração (g) foi avaliado em cada unidade experimental, através de cálculo da diferença entre a quantidade de ração fornecida e as sobras de ração no final de cada semana.

47 45 A conversão alimentar (CA) das aves, por sua vez, foi avaliada por dúzia de ovos (kg/dz), determinando-se quanto de ração foi consumida para produzir uma dúzia de ovos e também pela massa de ovos (g/mo), avaliando-se quantos gramas de ração foram necessárias para produzir um grama de ovo: Consumo de ração no período (g) = ração ofertada sobra da ração CA em dúzia de ovos (kg/dz) = consumo de ração / número de dúzias CA em massa de ovo (g/mo) = consumo de ração / peso do ovo Mortalidade As aves eram verificadas diariamente e no caso de alguma morte, a ave era retirada da gaiola e pesada. Era realizada a necropsia do animal, anotava-se o dia da morte e se ajustava a quantidade de ração ofertada por gaiola Coeficiente de digestibilidade Realizada após a primeira semana de adaptação às dietas experimentais e avaliada durante um período de cinco dias. O método utilizado foi através da coleta total de excretas, uma vez ao dia. Foi determinada a quantidade de ração consumida e o total de excretas produzidas no período por unidade experimental. Foi realizada a análise bromatológica das dietas e excretas e, por fim, calcularam-se os coeficientes de digestibilidade aparente em base seca, para cada tratamento: Digestibilidade (%) = 100 * (consumo de ração produção de excreta) consumo de ração

48 Qualidade de ovos Semanalmente foram realizadas as análises de qualidade externa e interna dos ovos, totalizando 120 ovos avaliados. Foram determinados o peso do ovo (g), a gravidade específica (g/cm 3 ), a porcentagem (%) e espessura da casca (mm) para a qualidade externa. Porcentagem de gema e de albúmen, unidade Haugh e coloração da gema para a qualidade interna. Todos os ovos foram pesados em balança analítica com precisão de 0,01 g. Para a gravidade específica foram utilizados dez baldes plásticos com soluções de cloreto de sódio em concentrações de 1,050 a 1,086 g/cm e com intervalos de 0,004 g/cm entre os baldes. Os ovos eram identificados e imersos nas soluções (da menor para a maior concentração), sendo anotado o valor da densidade do balde em que os ovos flutuavam. Após a quebra dos ovos, as cascas foram lavadas e secas em temperatura ambiente por 72 h e pesadas para o cálculo de sua porcentagem. A espessura da casca foi mensurada com micrômetro digital com precisão de 0,01 mm, utilizando-se a média das regiões basal, medial e apical. A porcentagem de gema foi determinada através de cálculo do peso da gema e do ovo inteiro e, para a porcentagem de albúmen, utilizou-se o cálculo de diferença entre o peso total do ovo e os pesos de casca e gema. A altura do albúmen espesso foi mensurada com o uso de paquímetro digital com precisão de 0,01 mm, para posteriormente calcular-se a unidade Haugh, considerada a principal variável para a qualidade interna de ovos. As determinações foram realizadas através das seguintes fórmulas: Porcentagem de casca (%) = 100 * (peso da casca / peso do ovo) Porcentagem de gema (%) = 100 * (peso da gema / peso do ovo) Porcentagem de albúmen (%) = 100 * (peso do albúmen / peso do ovo) Peso do albúmen (g) = (peso do ovo peso da gema peso da casa)

49 47 Unidade Haugh = 100log (H +7,57 1,7W 0,37 ), em que: H= altura do albúmen espesso (mm) W= peso do ovo (g) A avaliação da cor da gema (Figura 7) foi realizada através dos métodos subjetivo e objetivo: Figura 7 Fotografia. Coloração das gemas de ovos de codornas japonesas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides. Fonte: Acervo pessoal. Para o método subjetivo utilizou-se leque colorimétrico (DSM ) com a presença de escores de 1 a 15 entre tons do amarelo até o laranja. Pelo colorímetro digital (Konica Minolta ), fez-se a avaliação objetiva. O equipamento foi previamente calibrado de acordo com padrões pré-estabelecidos para coloração de ovos (BIBLE; SINGHA, 1993) e avaliados três parâmetros de cor de acordo com o sistema CIE (Commission International de L Éclairage): L*, a* e b* (Figura 8).

50 48 Figura 8 - Sistema de coordenadas de cor CIE. Fonte: Adaptado de Harder (2005). Segundo Harder (2005), o valor L* (luminosidade) varia do branco (L=100) ao preto (L=0), o valor de a* envolve a coloração na região do vermelho (+a*) ao verde (-a*) e o valor b* varia da coloração do amarelo (+b*) ao azul (-b*) Análise sensorial Foram separados os ovos produzidos nos três dias finais do experimento para a análise sensorial descritiva para cor, textura e sabor, com a finalidade de verificar a aceitação dos consumidores. As análises foram realizadas no Laboratório de Análise Sensorial do Departamento de Ciência e Tecnologia de Alimentos (DCTA) UFPEL. Do total de 294 ovos produzidos, foram selecionados aleatoriamente 30 por tratamento para a análise sensorial. Os ovos foram cozidos durante 8 minutos (contados a partir do início da fervura da água), descascados e armazenados em potes de vidro com água filtrada. Permaneceram em refrigeração por 12 h, até o início da avaliação.

51 49 No teste sensorial, foi fornecida uma amostra de cada tratamento (ovos provenientes de codornas alimentadas com dietas contendo inclusão de 0, 2, 4, 6 e 8% de farinha de Azolla filiculoides), apresentado inteiro e solicitado que o próprio avaliador os cortasse ao meio (Figura 9), conforme descrito por Moraes (1985). Figura 9 Fotografia. Análise sensorial de ovos de codornas japonesas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides. Fonte: Acervo pessoal. A preferência das amostras foi avaliada por 30 avaliadores, entre docentes e discentes da UFPel, não treinados e recrutados voluntariamente, para avaliação dos atributos: cor da gema, sabor e textura. A avaliação ocorreu de modo que a amostra padrão (P sem inclusão da Azolla filiculoides) serviu de comparação para os demais tratamentos, através de uma escala hedônica (estruturada com sete pontos), em que 1= muito melhor que a padrão e 7= muito pior que a padrão (BRASIL, 2005). Os provadores foram acomodados em cabines individuais específicas para a avaliação, conforme recomendado por Ferreira, Almeida e Pettinelli (2000). Cada um deles recebeu a amostra padrão e as demais oriundas dos tratamentos devidamente codificadas com algarismos aleatórios de três dígitos acompanhados de uma ficha de avaliação, juntamente com um copo d água mineral sem gás, o qual foi recomendado uma pequena ingestão no intervalo de cada degustação.

52 Biometria da carcaça e de órgãos Ao final do período experimental, as aves passaram por jejum de 10 horas para serem abatidas. Foram selecionadas aleatoriamente seis codornas de cada tratamento para a análise da carcaça e coleta de órgãos. O processo de eutanásia foi realizado no Laboratório de Experimentação Zootécnica, com a utilização de câmera de concentração de gás, com anestésico inalatório Isoflurano. A eutanásia foi realizada pelo Médico Veterinário responsável técnico pelo Setor de Avicultura. Foram pesados em balança analítica de precisão (0,01 g) a carcaça inteira e limpa (sem pés, cabeça e pescoço), a moela, o coração, o fígado e a gordura abdominal e medido o comprimento da moela e do coração com paquímetro digital (0,01 mm). Para a determinação do comprimento total do intestino, avaliou-se as suas duas porções (delgado e grosso), desde o duodeno até o final da cloaca. Para o comprimento do intestino delgado foi medido desde o duodeno até o final do íleo, sendo este limitado pelos ceca. Foi utilizada fita métrica (cm) sob o órgão distendido Morfometria intestinal Foi coletada uma parte do íleo de aproximadamente 1 cm para análise histológica de avaliação da altura das vilosidades, profundidade das criptas e relação vilo:cripta, todas medidas em micrômetros (μm), com o uso de microscópio eletrônico. As amostras foram preparadas e analisadas no Laboratório de Preparação de Biologia Celular, Histologia e Anatomia ao Desenvolvimento, no Departamento de Morfologia, do Instituto de Biologia (UFPel). Após a coleta, os fragmentos foram armazenados em formol 10%, para manter a integridade do tecido até o início das análises. Passaram por processo de desidratação em série crescente de álcoois (70%, 80%, 90% e absoluto com 40 min em cada), tratados com Xilol (três banhos de 40 min para cada) e incluídos em parafina, conforme descrito por Ribeiro, Grötzner e Filho (2012). Os blocos foram

53 51 cortados em micrótomo na espessura de 5 µm e entre cada amostra eram descartados pelo menos dez cortes. As lâminas foram coradas com Hematoxilina e Eosina, conforme descrito por Beçak e Paulete (1976) e visualizadas em um fotomicroscópio de luz acoplado em um computador com um sistema de análise de imagens. As medidas de altura e profundidade (Figura 10) seguiram as recomendações de Gava (2012) e foram aferidas 12 medidas em cada amostra, totalizando 720 vilos e criptas distintos. Figura 10 Fotografia. Morfometria intestinal de codornas japonesas alimentadas com farinha de Azolla filiculoides em imagem microscópica (10x). a= altura do vilo; b= profundidade da cripta. Fonte: Acervo pessoal Análise econômica Foi realizada análise econômica das diferentes dietas experimentais, a fim de avaliar a redução dos custos a partir da utilização da farinha de Azolla filiculoides. Os valores do suplemento mineral e vitamínico e dos aminoácidos sintéticos foram disponibilizados pela empresa Polinutri Alimentos S.A. Para os demais ingredientes foram utilizados os valores médios obtidos no comércio da cidade de Pelotas/RS durante de mês de novembro de 2019.

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